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Sexado molecular de aves
En muchas especies de aves no es posible la determinación del sexo mediante caracteres externos por lo que ha de recurrirse a técnicas moleculares. En las aves la hembra es el sexo heterogamético con dos cromosomas sexuales distintos llamados Z y W y el macho es el sexo homogamético con dos cromosomas Z. Con la aplicación de técnicas moleculares basadas en PCR se pueden generar fragmentos amplificados de ADN que difieren en tamaño en los cromosomas sexuales y esto permite la discriminación de estos productos mediante electroforesis en geles de agarosa. Cuenta con el certificado de Calidad ISO 9001.
Si quiere ampliar la información del procedimiento haga click aquí
Secuenciación automática: secuenciación de ADN y análisis de microsatélites
El servicio dispone de un sistema de electroforesis capilar basado en fluorescencia, el analizador genético de 16 capilares ABI PRISM 3130XL de Applied Biosystems.
El servicio está dedicado a entregar lecturas de secuencias, genotipado o análisis del tamaño de fragmentos generados por PCR. El servicio también ofrece asesoramiento técnico y ha obtenido el certificado de calidad ISO 9001.
Para el análisis de los resultados a disposición de los usuarios, se dispone de:
- Sequencing analysis software de Applied Biosystems
- Sequencher de Gene Codes
- Geneious de Biomatters
- Gene Mapper de Applied Biosystems
Extracción robotizada de ADN
El laboratorio cuenta con dos robots:
- Uno para extracción de ADN mediante sistema de filtraciones y para preparación de reactivos de PCR y dispensación en placa.
- Otro para el manejo de muestras post PCR, especialmente mezclas de productos de PCR para marcadores microsatélites.
Bioanalyzer
El servicio cuenta con el Bioanalyzer 2100 de Agilent Technologies y ofrece medidas de calidad, cantidad y tamaño de ADN y ARN.
El uso de este equipo está relacionado con el uso del secuenciador de nueva generación ya que se ha convertdo en un requerimiento iomprescindible para determinar la calidad y el tamaño de las librerías preparadas antes de procesarse para la secuenciación. Para ello el LEM dispone habitualmente del chip de Agilent:
High Sensivity DNA.
Para concentraciones bajas de dsDNA.
Rango cualitativo desde 5pg/
Rango cuantitativo: 5-500pg/
Rango de tamaños: 50-7000bp
11 muestras en 30min.
El LEM dispone de chips para medir RNA y mRNA para estudios de expresión genérica.
RNA 6000Nano chips
Para concentraciones medias de RNA total t mensajero
Rango cualitativo: 5-500ng/ de RNA total, 25-250 ng/ de mRNA.
Rango cuantitativo: 25-500ng/ de RNA total, 25-250ng/ de mRNA.
12 muestras en 30min.
Pirosecuenciador
El LEM ofrece el servicio de secuenciación masiva utilizando la plataforma GS Junior system 454 Life Sciences de ROCHE . Este secuenciador puede hacer básicamente dos tipos de secuenciacíon: secuenciación de amplicones y secuenciación shot-gun. La secuenciación de amplicones conlleva la secuenciación de los productos generados por PCR, generalmente de un número múltiple de individuos porque se pueden codificar. Para facilitar este uso el LEM dispone de un set de 96 MIDs (identificadores) recomendados por Roche a disposición de los usuarios. Esta metodología ha sido optimizada y se está usando cada vez más en un creciente número de grupos. El segundo tipo de secuenciación de shot gun, genera aleatoriamente trozos de secuencias a partir de ADN genómico de alta calidad o de long range PCR.Para este servicio se ofrece asesoramiento y ayuda en la preparación de la librerías, el laboratorio lleva a cabo el resto del proceso: PCR en emulsión, recuperación y secuenciación en la plataforma.